Садржај
Израчунавање титра за вирус је компликован начин за рећи да научник броји број вируса у одређеном узорку. Да би израчунали титре вируса, научници инфицирају плочице растућих бактерија вирусним раствором у различитим концентрацијама и утврде број вируса у оригиналном раствору рачунајући бактерије које су умрле услед вирусне инфекције.
Серијска разблажења
Обуците рукавице, напуните 10 епрувета са културом од 9 мл бујона и означите их "10 ^ -1", "10 ^ -2", "10 ^ -3", и тако даље, све до "10 ^ -10." ће се користити за вирусна серијска разблажења која се користе за израчунавање титра фага. Будући да вируси могу нарасти до невјероватно високе концентрације, морате их разриједити да бисте их ефикасно бројали. Свака епрувета представља десетоструко разблаживање вируса.
Узмите 1 мл културе вируса за коју желите да израчунате титар фага и помоћу пипете га пребаците у епрувету под називом "10 ^ -1". Добро измијешајте епрувету. Ово је ваше прво десетоструко разблаживање.
Узмите 1 мл мешане културе из епрувете са ознаком „10 ^ -1“ и пренесите је новом пипетом у следећу епрувету, са ознаком „10 ^ -2“.
Наставите овај образац да бисте створили серијску серију разблаживања. На крају ћете имати 9 епрувета од 9 мл и 1 епрувету од 10 мл. Оптерећења вируса у епруветама биће разблажена било где од 10 пута (ваша прва епрувета) или 100 пута (ваша друга епрувета) до десет милијарди пута (ваша последња епрувета).
Припрема плоча за прорачун титра
Узмите 10 епрувета меког агара са триптоном и 10 Петри плоча и означите их тако да одговарају вашим епруветама за серијско разређивање.
Отпустите поклопце тако да не искачу на топлоти, а затим епрувете са агарима ставите у чашу кипуће воде. Ово ће растопити агар тако да га можете сипати у Петријеве тањире.
Пребаците своје епрувете у топло купатило постављено на најмање 45 степени Целзијуса. Ово ће осигурати да се ваш агар не очврсне у епруветама пре него што будете имали прилику да га сипате у Петријеву посуду.
Додајте две капи бактеријске културе у свој агар и лагано измешајте. Ово су бактерије које ће бити убијене, омогућујући вам рачунање броја вирусних честица у одређеном раствору.
Додајте 1 мл сваког серијског разблажења у одговарајућу епрувету са агарима док су епрувете још увек у топлој воденој купељи. На пример, 1 мл вашег серијског разређивања од 10 ^ -1 треба да иде у епрувету са агарима са ознаком "10 ^ -1."
Помијешајте сваку епрувету, а затим сваку епрувету улијте у Петри плочу са одговарајућом налепницом. Ово ће створити танак слој агарја који је инокулиран бактеријама и вирусима у свакој плочи. Пустите да плоче расту преко ноћи у инкубатору.
Бројање и израчунавање титра вируса
Извадите тањире из инкубатора и прегледајте их. Требало би да видите облачна подручја широм плоче у којима су порасле бактерије, осим малих прозирних тачака које се називају плакови. Ови плакови су мрље мртвих бактерија, а сваки плак представља један вирус.
Пронађите плочу која има између 30 и 300 плакова и рачунајте тачан број плоча на тој плочи.
Унесите број плоча на своју плочу и помножите са 10. Ако бисте рачунали 157 плоча, добили бисте 1570.
Помножите број који сте добили у претходном кораку са обрнутим бројем на епрувети за разблаживање. На пример, ако је плоча коју сте одабрали била плоча 10 ^ -5, помножили бисте 1570 са 10 ^ 5 да бисте добили 157000000. Коначни број је ваш фазни титар и представља број вируса по мл ваше оригиналне културе.