Садржај
- ТЛ; ДР (Предуго; нисам прочитао)
- Пуфер и сол
- Средства за растварање
- Хемирајућа средства и инхибитори
- Алкална лиза
Лисе је реч која потиче од грчког и значи само „раздвојити се“ или „распрснути се“. Појединости, појмови се односе на оно што се дешава са ћелијама у пуферу за лизирање, решење које их прекида да би извукли њихов садржај. Научници користе пуфере за лизу када ваде ДНК или протеине из ћелија за анализу, посебно у случају бактерија. Тип пуфера за лизирање ћелија варира у зависности од врсте експеримента, иако су следећи неки уобичајени избори.
ТЛ; ДР (Предуго; нисам прочитао)
Пуфери лизе помажу при разбијању отворених ћелија, па им се може приступити или уклонити њихов садржај. Неки примери укључују соли, детерџенте, хелатне агенсе и инхибиторе и неке алкалне хемикалије.
Пуфер и сол
Пуфери стабилизирају пХ док се ћелије дијеле. Трис-ХЦЛ представља једну од најчешћих хемикалија за пуферирање на пХ 8. ХЕПЕС је још једна уобичајена хемијска супстанца у овим експериментима. Натријум-хлоридна со такође може повећати јонску снагу, укупну концентрацију раствора изван ћелија. Ова последња тачка има одређен значај јер вода може да дифундује кроз ћелијске мембране од региона ниске концентрације раствора до региона високе концентрације раствора.
Средства за растварање
Детерџенти растварају ћелијске мембране тако да садржај ћелије може изаћи. Имају и амфипатичку молекулску структуру (тј. Молекуле с једним крајем, који лако ступају у интеракцију са молекулама воде, док други хидрофобни или „страх од воде“ има крај). Они могу растворити масти формирајући мицеле, мале гроздове где хидрофобни репови молекула детерџента усмеравају према молекулама масти. Уобичајени детерџенти укључују натријум додецил сулфат или СДС, НП-40 и тритонКс.
Хемирајућа средства и инхибитори
Пуфери за лизију обично укључују и хелатне агенсе попут етилендиаминетеросирћетне киселине (ЕДТА) или етилен гликол тетра сирћетне киселине (ЕГТА). Ове хемикалије се везују за јоне метала са два позитивна набоја (нпр. Магнезијум и калцијум), чинећи их недоступним за остале реакције. Многим ДНК (протеинима који жвачу ДНК) и протеазама (протеинима који режу друге протеине) потребни су јони магнезијума да би функционисали, тако што им је одузет овај кључни састојак, ЕДТА и ЕГТА помажу у смањењу нивоа активности протеазе или ДНК. Међутим, они то не искључују у потпуности, а неке протеазе не зависе од кофактора магнезијума, тако да пуфери за лизу понекад укључују и хемикалије назване инхибиторима протеазе, који се везују за протеазе и спречавају њихово правилно функционисање.
Алкална лиза
Алкална лиза, веома уобичајена техника чишћења плазмида од бактерија, укључује три решења. Прва садржи глукозу, трис-ХЦЛ пуфер, ЕДТА и РНАзу. Глукоза ствара високу концентрацију раствора изван бактерија, тако да они постају мало мршавији, што их олакшава лизирање. ЕДТА и трис-ХЦЛ функционишу као што је већ описано, док ће РНАза жвакати било коју РНК у ћелији да би је избацила са пута. Други раствор заправо лизира ћелије. Овај садржи детерџент за СДС и НаОХ, који подиже пХ на 12 или више, денатурирајући протеине унутар ћелије и узрокујући да се ДНК одвоји у појединачне нити. Трећи раствор садржи калијум ацетат како би се пХ вратио на неутралнији ниво како би се ланци плазмидне ДНК могли поново вратити. У међувремену, денатурирани протеини се скупљају и таложе, док додецил-сулфатни јони заједно са калијум-јонима стварају нерастворљиво једињење, које се такође таложи из раствора.