Садржај
Течна хроматографија високих перформанси (ХПЛЦ) је лабораторијска техника која се користи за одвајање и идентификацију једињења. То је врста кроматографије на колони која се ослања на различите поларитете једињења у раствору како би их раздвојила. ХПЛЦ се разликује од стандардне хроматографије на колони по томе што користи притисак да би раствор брже прогурао кроз колону, и због тога даје брже, а понекад и тачније резултате. Циљ је одвојити једињења у колони и оставити их одвојено.
Цоелутион
Због брзине ХПЛЦ и ослањања на различите поларитете једињења, два једињења сличне структуре и поларитета могу истовремено изаћи из уређаја за хроматографију или скоро у исто време. То је познато као заговор. Одузимање отежава утврђивање тачно који део мешавине је елуиран у том тренутку.
Адсорбована једињења
ХПЛЦ обично користи стаклени стуб испуњен куглицама направљеним од различитих материјала. Смеше које се форсирају кроз колону садрже хемикалије које се различитом јачином везују за перле. Јачина везивања, која зависи од сличности у поларитету, одређује колико дуго ће се хемикалија везати за перлу пре него што се ослободи. Нека једињења се вежу тако снажно да се у основи никада не ослобађају из зрна у колони и никада се не мере у раствору који излази из колоне.
Трошак
Типичне лабораторијске технике раздвајања укључују развијање теста или методе раздвајања, а затим спровођење тог испитивања ради одвајања појединачних једињења од раствора. Међутим, то обично резултира у вишеструким решењима која такође морају да се подвргну процедурама, што доводи до експоненцијалног повећања сложености. Иако ХПЛЦ често може поједноставити и убрзати овај процес, трошкови развоја ХПЛЦ уређаја могу постати огромни. Развој ХПЛЦ апарата, иако много ефикаснији, много је скупљи од развоја других тестова за одвајање једињења. То га чини финансијски одрживим за многе мале приватне лабораторије.
Сложеност
ХПЛЦ се не користи само за одвајање једноставних једињења, већ се користи и за изоловање одређених протеина из ћелијске смеше. У овом случају зрнца у колони су обично обложена антителом специфичним за протеин који требате да сакупите. Протеини везују антитела, а преостали раствор се пропушта кроз колону, а затим се протеини ослобађају помоћу другог раствора и сакупљају. За ово је потребан високо квалификован техничар да у сваком тренутку надгледа колону и провјери да ли поступак тече точно онако како је планирано.