Садржај
- Разблаживање узорака, садња и инкубација
- Ручно бројање
- Аутоматизовано бројање
- Учинковитије бројање компликованије
Један од класичних начина за одређивање концентрације микроба у узорку је разблаживање узорка, раст микроба на плочама и бројање колонија. Посуђени микроби расту из јединице која ствара колонију која се састоји од једне или више ћелија у видљиву колонију која се може видети и пребројати. Бактерије су најчешћи микроби који се процењују коришћењем броја плоча. Број колонија користи се за откривање и бројање микроба у земљи, води и храни. Протоколи за бројање колонија наглашавају тачан и методичан приступ.
Разблаживање узорака, садња и инкубација
Ако једноставно размажете узорак микроба на плочи са агарима, видећете толико јединица које формирају колонију да би се поједине колоније стапале, па их је немогуће пребројати. Да бисте решили овај проблем, умешајте узорак у течни медијум, узмите малу количину те смеше и даље разблажите. Поновите овај поступак шест до 10 пута. Коначно разређивање раширите на плочи са агарима и инкубирајте четири до седам дана пре него што бројите колоније.
Ручно бројање
Примарни трик у бројању колонија је бројање сваке колоније тачкица једном. Један од приступа је постављање Петријеве посуде на позадину решетке и бројање колонија у свакој ћелији решетки, кретањем у методском обрасцу кроз све ћелије. Обележавање пребројаних колонија на полеђини Петријеве шоље такође може бити од користи. Генерално, требаће да избројите најмање три плоче; само користите плочице које садрже 30 до 300 колонија да би се направили чврсти закључци, сугерише Мицробиологи Нетворк, фирма која пружа услуге консултација лабораторијама и произвођачима. Плоче са колонијама које су пребројне или имају премало колонија треба поново посијати новим разблаживањем.
Аутоматизовано бројање
Људска грешка доприноси времену укључивању у ручно бројање колонија. Да бисте побољшали и тачност и ефикасност, ставите Петријеву посуду у аутоматизовани уређај за бројање колонија. Аутоматизовани бројачи колонија сликају јело, одвајају колоније од позадине и затим користе алгоритам за бројање колонија на тањиру. Алгоритми могу имати потешкоћа у разликовању колонија када се две или више колонија додирују по ивицама, тако да је ово подручје у току развоја софтвера.
Учинковитије бројање компликованије
Тачност израчунавања густине микроба из броја колонија има одређена ограничења. Јединице које формирају колонију могу бити једна ћелија, ланац ћелија или читав низ ћелија. Претпоставка је да колонија представља једну ћелију, па концентрације израчунате из броја колонија могу бити ниске. Различити микроби требају различите услове раста, а колоније на плочи представљају само оне микробе који успевају на том медију раста под тим условима инкубације. Поред тога, бројање колонија не региструје мртве ћелије, што је важно питање када вам је потребна концентрација ћелија у оригиналном узорку.