Садржај
Спектрофотометар се користи за одређивање концентрације одређених једињења, као што је протеин, у раствору. Генерално, кроз кивету испуњену узорком сија светло. Измери се количина светлости која апсорбује узорак. Пошто једињења апсорбују светлост у различитим спектралним опсезима, за анализу се мора поставити права таласна дужина. Постоје бројни начини за израчунавање концентрације непознатих узорака помоћу спектрофотометрије, међутим коришћење референтних стандарда даје најбољу тачност. Штавише, стандарди такође указују на то да спектрофотометар не ради или постоје други проблеми са анализом.
Рачунање помоћу једнаких правих линија
Анализирајте референтне стандарде на почетку анализе. Стандарди су познате концентрације и користе се за калибрацију опреме и провјеру тачности. Сви узорци требају бити у радном опсегу стандарда. Ако не, узорке ће требати разблажити или повећати концентрацију стандарда.
Направите дијаграм расипања или линијски графикон са стандардним очитањем концентрације и апсорпције. Концентрација ће бити на оси и, а апсорпција на к оси. На пример, стандарди су 1 ппм, 2,5 ппм и 5 ппм. Дате апсорпционе вредности су биле 1 ппм = .25, 2.5 ппм = .5, и 5 ппм = .75.
Форматирајте линију тренда како бисте приказали једначину на графу. Једнаџба ће показати формулу и = мк + б. На пример, користећи стандарде у кораку 2, једначина је и = .1224к + 0,1531. Већина линија тренда пресреће се на нули, али то зависи од аналитичке методе и вредности Р-квадрата.
Анализирајте непознате узорке и бележите очитавања апсорпције.
Помоћу једначине (и = мк + б) одредите концентрацију узорака.
Разумевање једнаџбе правих линија
Нека је "И" једнака концентрацији. За то ће се решити.
Нека је "Кс" једнака апсорпцији узорка. Ово је апсорпција мерена спектрофотометром.
Допустите да "" изједначи нагиб и "б" да изједначи и-пресретање. Оба су дата, међутим, ако је линија тренда форсирана кроз 0, тада ће „б“ бити 0.
Решите за концентрацију. Користећи пример из корака 3, замените "к" као задану апсорпцију од .563. Стога:
и = .1224 (.563) + 0.1531
и (концентрација) = .222011