Садржај
Гел електрофореза је метода која се користи у лабораторијама за мерење и сортирање ланаца ДНК. То је неопходно јер је ДНК у нормалним условима премали за манипулисање, чак и када се посматра помоћу већине микроскопа. Лабораторија гел електрофорезе користи релативно једноставан поступак, а иста основна техника се такође може користити за одвајање појединачних протеина.
Гел матрица
Да бисте започели поступак електрофорезе гела, прво морате да креирате гел. Гелови се обично праве у танким листовима користећи супстанцу која се зове агароза. Агароза у праху се ставља у тиквицу, а затим следи раствор слане воде који се назива пуфер. Ова мешавина агарозе и пуфера се загрева док се две супстанце не растопе, а затим излију у калуп за формирање. Уређај који се зове чешаљ поставља се на један крај калупа пре него што се гел охлади. Када се гел охлади, чешаљ се уклања, остављајући мале прорезе који ће се користити за држање ДНК узорака.
Посебна карактеристика охлађене мешавине агарозе (назване гел матрикс) произлази из чињенице да је створена сланом водом. Када се наелектрише, матрица ће постати проводљива, омогућавајући струји да тече дуж њене дужине. Још једно посебно својство гел матрице је присуство редовних, микроскопских рупа. Ове рупе омогућит ће ДНК ланцима да путују кроз гел матрицу и олакшати поступак сортирања.
Комора за електрофорезу
Ваш следећи корак је стварање коморе за електрофорезу. Ово је мала правоугаона кутија, ожичена са позитивним и негативним електричним прикључком на оба краја. Коморе су обично плитке, довољно мале да стану на сто и изграђене су од прозирних материјала попут плексигласа.
Раствор слане воде се излива на дно коморе за електрофорезу, а матрикс гела се мало потапа у тај раствор. Слана вода служи у две сврхе: помаже проток електричне енергије и одржава влажан гел матрикс. Пошто се ДНК покреће негативним набојем, поставите матрицу тако да ће се ваши узорци налазити поред ваше негативне електричне везе.
Припрема ДНК
Затим се припремају ДНК узорци. Пошто је ДНК у раствору готово па и немогуће видети, средство за бојање звано пуфер за пуњење додаје се сваком појединачном узорку. Ово средство такође згушњава раствор ДНК, чинећи га мање исцрпљивим и употребљивим. Помоћу пипете пренесите узорак ДНК раствора у сваки наизменични утор у гел матрици. У празан утор између сваког узорка ставите мало раствора ДНК чија дужина већ знате (звана ДНК стандард) за контролу и поређење експеримената.
Укључите напајање
Сада укључите своју комору за електрофорезу. Под негативном снагом, ваши ДНК узорци биће приморани кроз дужину коморе. Мали ланци ДНК брже ће се кретати кроз гел матрицу и за кратко време ће се одвојити од дужих, споријих нити. Боја у боји средство омогућава вам да пратите траг ДНК. Нећете моћи да видите појединачне ланце ДНК, али ће се ланци исте дужине зближити.
Завршни кораци
Када се ДНК сортира, матрица се уклања из коморе за електрофорезу. ДНК се затим обоји како би се омогућило лакше мерење и испитивање.