Садржај
У хемијским реакцијама које катализују ензим, ензим смањује количину потребне активационе енергије привремено везањем са супстратом и увијањем у напрегнуто стање. К (катализатор) или "кцат" за реакцију се односи на концентрацију независну од концентрације за брзину којом одређени ензим може метаболизирати супстрат у молекулу производа. Да би израчунали кцат, научници прво мешају неколико епрувета са различитим концентрацијама супстрата (познатих као "ензиматски тест") и тестирају их у сталним временским интервалима светлосним спектрофотометром да би мерили растуће концентрације молекула производа. Ови подаци се затим цртају на графикону и анализирају.
Израчунавање почетних брзина
Нацртајте графикон концентрације производа према времену за податке из прве епрувете за ензимске тестове. Напомена: хоризонтална осовина треба да буде "време", а вертикална ос треба да буде "концентрација производа".
Израчунајте линеарну регресијску линију за тачке података које сте исцртали у Одељку 1, Корак 1. Док Екцел и графички калкулатори могу лако одредити овај линеарни модел, можете добити процену нагиба регресијских линија дељењем разлике у концентрацији производа између суседних података бодова по њиховој разлици у времену.
Забележите нагиб линеарне регресијске линије из одељка 1, корака 2 као "почетну брзину реакције (Во)." Напомена: у моделу регресијске линије "= м + б", коефицијент "м" је нагиб.
Поновите кораке 1, 2 и 3 за остале епрувете у испитивању.
Израчунавање Вмак-а
Нацртајте обрнуту концентрацију супстрата за сваку епрувету насупрот обрнутој почетној брзини реакције (из одељка 1, корак 4). На пример, ако је почетна брзина епрувете са почетном концентрацијом супстрата од 50 микромоларних (уМ) била 80 уМ / с, инверзи би били 1/50 уМ за концентрацију супстрата и 1/80 уМ / с за почетну брзина. Напомена: обратна концентрација супстрата треба да буде на водоравној оси, а инверзна почетна брзина на вертикалној оси.
Напомена: концентрација супстрата треба да буде на водоравној оси, а почетна брзина реакције треба да буде на вертикалној оси.
Одредите линију линеарне регресије за графикон који сте исцртали у одељку 2, корак 1. Напомена: јер ћете требати знати и-пресек за регресијску линију, тачке из одељка 2, корак 1, треба да унесете у Екцел или а графички калкулатор и користите уграђену функцију регресијског моделирања.
Поделите 1 са и-пресеком од линеарне регресијске линије. Ово ће вам дати вредност инверзног Вмак-а, максималну брзину реакције ензима. Напомена: ако модел линеарне регресије има облик "= м + б", тада би вредност "б" била и-пресек. Поделите 1 са "б" да бисте израчунали инверзију Вмака.
Поделите 1 према резултату из Одељка 2, Корак 3 да бисте израчунали стварну вредност Вмак.
Одредите концентрацију ензима у оригиналном тесту (погледајте сирове податке). Напомена: концентрација ензима је иста за све епрувете; само концентрације супстрата варирају у испитивању.
Поделите Вмак (из одељка 2, корак 4) према концентрацији ензима (из одељка 2, корак 5). Резултат је вредност Кцат.