Садржај
- Како раде пуфери
- Захтеви пуфера
- Одабир одговарајућег пуфера
- Како променити пХ пуфера
- Примери биолошких пуфера
У ћелијама и живим организмима течност која се налази у и у ћелијама се одржава константним пХ. ПХ унутар овог система је често пресудан за биохемијске реакције које се одвијају у организму. Да би проучавали биолошке процесе у лабораторији, научници користе пуфере да би одржали тачан пХ током експеримента. Многе биолошке пуфере су изворно описали Гоод и колеге 1966. године и данас се користе у лабораторијама.
Како раде пуфери
Пуфер је једноставно раствор који садржи слабу киселину и њену коњугациону базу. Када се дода киселина у пуфер, она реагује са базом коњугата, стварајући слабу киселину и тешко утиче на пХ раствора.
Захтеви пуфера
Бројне карактеристике чине биолошки пуфер ефикасним. Треба да буду растворљиви у води, али нису растворљиви или минимално растворљиви у органским растварачима. Пуфер не би могао да прође кроз ћелијску мембрану, јер то може утицати на понашање ћелије. Пуфери требају бити нетоксични, не би требали апсорбирати УВ зрачење и требали би остати инертни и стабилни током експерименталног процеса. Температура и јонски састав не би требало да мењају пХ или капацитет пуферисања.
Одабир одговарајућег пуфера
Изабрани пуфер треба да има пКа у опсегу оптималном за испитивани процес. Пуфер са вишим пКа је погодан ако је вероватно да ће доћи до повећања пХ током експеримента и обрнуто ако се очекује да пХ падне. Концентрације пуфера треба да буду оптимизиране, јер концентрације веће од 25 мМ могу имати бољу способност пуфера, али могу инхибирати станичне активности као што су ензими. Метода такође диктира који бафер користити; на пример, у електрофорези је погодан пуфер са ниском јонском снагом да се спречи загревање матрикса гела.
Како променити пХ пуфера
Пошто пХ може да се промени са температурним променама, научници треба да тестирају пХ пуфера на температури на којој ће извести експеримент. Трис је пуфер посебно подложан промени пХ вредности са температуром. Сви пХ метри морају бити калибрирани на радној температури. Адитиви такође могу променити пХ, чинећи потребно поновно тестирање. За промену пХ додаје се киселина, обично хлороводонична киселина или база, обично натријум или калијум хидроксид; ово би требало радити полако да се спрече инактивације или хемијске промене у пуферу.
Примери биолошких пуфера
ТЕ пуфер, који износи 10 мМ Трис · ХЦл и 1 мМ ЕДТА, погодан је за бројне пХ вредности за складиштење нуклеинских киселина. Електрофореза је уобичајена метода за проучавање протеина или нуклеинских киселина; овај поступак користи бројне пуфере, укључујући Трис-ацетат-ЕДТА, Трис-глицин и Трис-борат-ЕДТА пуфере. Ови пуфери спречавају загревање гел матрикса и могу да садрже адитиве као што су уреа и СДС, у зависности од испитивања.