Садржај
- Предност: осетљивост
- Предност: Специфичност
- Недостатак: склон лажним или субјективним резултатима
- Недостатак: Висока цена и технички захтев
Вестерн блот, аналитичка техника која се користи да се прецизира одређени протеин у датом узорку, користи способност ензима или примарног антитела обележеног флуоресценцијом да се веже за свој специфични антиген. То је процес у три корака који започиње гел електрофорезом, а потом следи блотјом мембране и сондирањем антитела. Откривање протеина може бити директно или индиректно, при чему последње користи обележено секундарно антитело усмерено против примарног. Иако прихваћен као рутинска техника анализе протеина, Вестерн блот има ограничења и предности.
Предност: осетљивост
Један од највећих аргумената у корист западног блота је његова осетљивост. Због своје способности откривања свега 0,1 нанограма протеина у узорку, техника може теоретски да послужи као ефикасно средство за рану дијагностику, осетивши чак и најмањи имуноген одговор вируса или бактерија у узорку пацијента. Индиректна западна мрља даље се темељи на овој осетљивости на способности секундарног антитела да појача интензитет сигнала који детектира систем за снимање. Већа осетљивост значи да је за испитивање потребно мање антитела, што значајно смањује трошкове лабораторија.
Предност: Специфичност
Техника Вестерн блот дугује своју специфичност два велика фактора која доприносе. Прво, гел електрофореза сортира узорак у протеинима различитих величина, набоја и конформација. Овај процес је сам по себи огроман корак ка детекцији, јер траке формиране у гелу већ дају трагове о величини протеина или полипептида од интереса. Специфичност интеракције антитело-антиген служи као други велики фактор. Пошто специфична антитела показују афинитет за специфичне протеине, процес може селективно детектовати циљни протеин чак и у смеши од 300 000 различитих протеина.
Недостатак: склон лажним или субјективним резултатима
Упркос својој осетљивости и специфичности, западни блот још увек може да произведе погрешне резултате. Лажно позитивни резултати када антитело реагује са ненамерним протеинима, што се често дешава када пацијент који се тестира на ХИВ има туберкулозу или бројне паразитске инфекције. Лажно негативна страна, с друге стране, лако може резултирати ако се већим протеинима не пружи довољно времена да се правилно пренесу на мембрану. Неправилно брисање и обрада често производе искривљене, избледеле или чак вишеструке опсеге, због чега резултати испитивања подлежу тумачењу техничара.
Недостатак: Висока цена и технички захтев
Трошак западног блота је саставни део великих индивидуалних трошкова за обележена антитела, квалификоване аналитичаре и лабораторијску опрему. Деликатни процес, западњавање блотмана захтева прецизност у сваком кораку за правилно идентификовање саставних делова узорка. Мала грешка у концентрацији реагенса или у периоду инкубације може бити погубна за цео процес. Најзад, опрема потребна за откривање и снимање - хемилуминесцентни, флуоресцентни, радиоактивни или ласерски систем за детекцију - може бити прескупа за просечну микробиолошку јединицу.