Садржај
Течна хроматографија високих перформанси је техника за лабораторијску анализу смеше. То је ефикасна врста хроматографије која за потискивање узорка смеше кроз колону користи високи притисак, а не само гравитацију. Узорак се убризгава, а затим пумпа која садржи високу количину притиска помаже да се узорак помера дуж напуњене колоне, где је раздвојен на појединачне компоненте. То раздвајање се затим анализира помоћу детектора како би се добили резултати.
Место убризгавања
Да би се убризгао у ХПЛЦ, узорак прво треба да се растопи у поларном течном растварачу, пожељно једном са познатим спектром ХПЛЦ да би се његови подаци могли разликовати од узорака. Течни раствор који садржи узорак се ставља у инструмент и шаље у колону. Стварна локација места убризгавања зависи од марке инструмената. У већини случајева поступак убризгавања је аутоматизован, али у неким случајевима лабораторијски радник мора убризгати узорак користећи малу иглу шприцева.
Компонента пумпе
Компонента пумпе ХПЛЦ јединице је неопходна јер обезбеђује притисак који потискује узорак кроз колону. Јачина пумпе варира, али снажна може произвести притисак до 6.000 пси или фунти по квадратном инчу, који се примењује након убризгавања узорка. То омогућава да се узорак брже и ефикасније прође кроз колону него ако би се кроз њега пролио само сила гравитације.
Опис колоне
Повећана брзина узорка који пумпа пролази кроз колону омогућава употребу другачије врсте колоне од оне која се користи у једноставној течној хроматографији. Материјал за паковање у колони може имати много мању величину честица, што повећава површину и стога помаже интеракције узорка са колоном. Већина ХПЛЦ колона ради кроз поларитет. Узорак је растворен у поларном растварачу, а колона је састављена од углавном неполарних угљоводоника. Поларни делови молекула узорка пролазе кроз колону веома брзо, јер они првенствено комуницирају са растварачем, док узорци неполарне компоненте остају у колони, формирајући слабе интеракције са компонентама колоне. Стога компоненте узорака силазе са колоне у редоследу од већине поларних до већине неполарних.
Функција детектора
Детектори такође варирају у зависности од типа ХПЛЦ инструмента који се користи. Међутим, већина функционише на исти основни начин. Извор ултраљубичастог светла светли на одвојеним компонентама узорка док силазе са колоне. Већина органских једињења апсорбује одређену количину светлости, тако да док пролазе поред примењене светлосне зраке, детектор може да покупи колико светлости апсорбује. Детектор такође бележи време задржавања компоненти на основу редоследа по коме спуштају колону. Овај излаз се затим може анализирати на основу површине врха да би се утврдила тачна природа компонената узорака.