Садржај
ДНК
Деоксирибонуклеинска киселина и протеини. ДНК је организован у јединице које се називају генима, од којих сваки кодира одређену РНК или протеинску секвенцу. Гени се проучавају како би се упознали са биолошком структуром и функцијама, еволуцијом, болестима и многим другим аспектима живих система. Да би се гени детаљно проучавали, ДНК се мора изоловати и очистити из ћелија која су од интереса.
ДНК екстракција
Иако се ДНК из једне ћелије може извући и проучити, то није довољно да се види голим оком. Да бисте добили количину довољну за калемљење, више ћелија морате радити са бољим (милионима).
Тачни протоколи знатно се разликују како би се узеле у обзир јединствене карактеристике одређених узорака, али општи кораци су хомогенизација, лиза, варење, одвајање и прикупљање. Поступак је најбоље извести у малој (у зависности од величине узорка) стакленој или пластичној цеви.
Узорак се обично меша или млева како би се ћелије темељито одвојиле једна од друге. То чини ћелијске састојке приступачнијим реагенсима који слиједе. Детерџент или ензими се затим додају у хомогенат да лизирају ћелијске мембране (и нуклеарне мембране ако су ћелије еукариотске) да би се ослободила ДНК. У овом тренутку, ДНК је окружен протеинима, липидима, угљеним хидратима - свиме осталим што се налазило у ћелијама.
Даљња ензимска пробава може бити потребна да би се протеини разградили да се не вежу за ДНК и ометају његово прикупљање. ДНК се одваја од остатка ћелијског садржаја додавањем хладног, чистог, етилног или изопропил алкохола. ДНК није растворљив у овим алкохолима, па ће се кондензовати покушавајући да минимизира његов контакт са алкохолом. Кондензовани ДНК се затим сакупља, обично центрифугирањем --- или умотавањем.
ДНА споолинг
Сакупљање ДНК калемљењем је ефикасно када се добије велика количина ДНК из поступка екстракције. То је такође одлична метода демонстрације, јер је импресивно запетљавање чисте ДНК јасно видљиво.
Да би се изолирао ДНК, корак раздвајања мора се извршити пажљиво. Ако није део претходно додате смеше реагенса за лизирање, у раствор се мора додати концентровани раствор соли (натријум хлорид) пре корака додавања алкохола. Хладни алкохол се полако излива са стране епрувете да би се формирао слој на врху воденог раствора, избегавајући мешање. Ако се изврши правилно, алкохол ће формирати свој властити слој поврх сланог слоја. Онда долази калемљење.
Да бисте узели ДНК из сланог слоја, пажљиво ставите стаклену мешалицу са слојем алкохола све док не дотакне дно епрувете. Полако завртите штап између прстију, док гледате интерфејс између два слоја. Ако има довољно ДНК, она ће се скупити на интерфејсу између слојева, формирајући млечно прозрачну масу. Окрећите штап да бисте омотали ДНК око њега (то је део за наматање) и извуците га из цеви. ДНК се може пребацити у другу епрувету чистог алкохола ради складиштења или даље анализе.